COA, або Certificate of Analysis, має стосуватися конкретної партії. HPLC (високоефективна рідинна хроматографія, метод перевірки чистоти)-чистота, мас-спектрометрія та mass content не дублюють одне одного: кожен показник відповідає на інше запитання про зразок.

Три рядки, які найчастіше плутають

Показник Що він показує Чого він не доводить сам по собі
HPLC purity Яку частку сигналу на хроматограмі займає головний пік за заданим методом Точну молекулярну масу, послідовність і кількість речовини у флаконі
MS (мас-спектрометрія) або LC (рідинна хроматографія)-MS Чи відповідає виміряна маса очікуваній масі молекули Чистоту зразка за площею піків або масову частку речовини
Mass content Скільки цільової речовини містить зразок за кількісною методикою Повний профіль домішок без окремого хроматографічного аналізу

HPLC розділяє компоненти суміші. У COA головний пік зазвичай пов'язують із цільовою речовиною, а площі інших піків показують домішки, що бачить саме цей метод. Результат залежить від колонки, рухомої фази, довжини хвилі та умов інтегрування. Тому цифра 99% без хроматограми й опису методу має меншу цінність, ніж повний звіт.

MS вимірює відношення маси до заряду і дозволяє зіставити спостережувану масу з розрахованою. Це сильна перевірка маси, але однакова маса не завжди означає однакову структуру. Ізомери та деякі модифікації можуть вимагати додаткових методів ідентифікації.

Mass content не дорівнює HPLC purity. Чистота за HPLC часто виражає відносну площу піків. Mass content показує кількісно визначену частку цільової речовини в матеріалі. Вода, залишкові солі та інші нецільові компоненти можуть впливати на цю величину навіть за високої HPLC-чистоти.

Ендотоксин: окремий рядок COA

Ендотоксин стоїть у COA окремо від HPLC-чистоти й mass content, бо відповідає на інше запитання. Це ліпополісахарид з оболонки грамнегативних бактерій, і хроматографічна чистота його не показує. Зразок може мати високий головний пік за HPLC і все одно містити ендотоксин, який потрапив на етапах синтезу або очищення [1].

Вимірюють ендотоксин LAL-тестом (гель-тромб, хромогенний або турбідиметричний варіант, гармонізований фармакопеями [3]). Результат записують в одиницях EU/mg або EU/mL. Порожнє поле в цьому рядку не означає нуль, воно означає, що показник не вимірювали.

Чому нетто-вміст пептиду буває нижчим за наважку

Маса порошку у флаконі не дорівнює масі цільового пептиду. Протиіон із синтезу (наприклад, трифтороцтова кислота або ацетат) і залишкова вода входять до загальної маси матеріалу, але пептидом не є. Тому кількісно визначений нетто-вміст пептиду часто нижчий за повну масу матеріалу [4].

Ідентичність молекули підтверджують окремо, зазвичай методом LC-ESI-MS з профілюванням домішок [2]. Ця перевірка показує, що це за речовина, а нетто-вміст показує, скільки в матеріалі цільової сполуки.

Як звірити COA за хвилину

  1. Зіставте номер партії на COA, етикетці та сторінці перевірки. Якщо номер відсутній або різний, звіт не можна віднести до вашого зразка.
  2. Для HPLC перевірте числовий результат разом із хроматограмою та умовами методу.
  3. Для MS зіставте очікувану й отриману масу. Корисно, коли звіт пояснює зарядовий стан або аддукт.
  4. Не перетворюйте одну цифру на три висновки. HPLC purity, MS identity і mass content мають залишатися окремими перевірками.

Який COA можна вважати зрозумілим

Зрозумілий звіт прив'язаний до лота, називає методи та показує первинні результати. Якщо лабораторія надає лише рядок з відсотком, варто попросити хроматограму, спектр маси та опис того, як визначали mass content.

Для партій Longeva номер лота можна звірити на сторінці перевірки. COA підтверджує параметри саме протестованого зразка. Він не замінює опис методу, не пояснює межі аналізу і не переноситься автоматично на іншу партію.

Загальний контекст COA та статусу research-use описано окремо: research-use пептиди і що підтверджує COA та чому походження і COA важливіші за ціну. Ця сторінка навмисно обмежена кількома ключовими аналітичними показниками COA і не претендує на повний перелік усіх методів.

Сертифікати аналізу наших партій: архів COA.

Джерела

  1. D'Hondt M, et al. Related impurities in peptide medicines. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2014. 10.1016/j.jpba.2014.06.012
  2. De Spiegeleer B, et al. Impurity profiling quality control testing of synthetic peptides using liquid chromatography-photodiode array-fluorescence and liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry: The obestatin case. Analytical Biochemistry, 2008. 10.1016/j.ab.2008.02.014
  3. Tamura H, et al. Outstanding Contributions of LAL Technology to Pharmaceutical and Medical Science: Review of Methods, Progress, Challenges, and Future Perspectives in Early Detection and Management of Bacterial Infections and Invasive Fungal Diseases. Biomedicines, 2021. 10.3390/biomedicines9050536
  4. Colalto C. Aspects of complexity in quality and safety assessment of peptide therapeutics and peptide-related impurities. A regulatory perspective. Regulatory Toxicology and Pharmacology, 2024. 10.1016/j.yrtph.2024.105699