COA, или Certificate of Analysis, должен относиться к конкретной партии. Чистота по HPLC, масс-спектрометрия и mass content не дублируют друг друга: каждый показатель отвечает на отдельный вопрос о образце.

Три строки, которые чаще всего путают

Показатель Что показывает Чего сам по себе не доказывает
HPLC purity Какую долю сигнала на хроматограмме занимает основной пик при заданном методе Точную молекулярную массу, последовательность и количество вещества во флаконе
MS (масс-спектрометрия) или LC-MS Соответствует ли измеренная масса ожидаемой массе молекулы Чистоту образца по площадям пиков или массовую долю вещества
Mass content Сколько целевого вещества содержит образец по количественной методике Полный профиль примесей без отдельного хроматографического анализа

HPLC разделяет компоненты смеси. В COA основной пик обычно связывают с целевым веществом, а площади других пиков показывают примеси, которые видит именно этот метод. Результат зависит от колонки, подвижной фазы, длины волны и условий интеграции. Поэтому цифра 99% без хроматограммы и описания метода менее полезна, чем полный отчёт.

MS измеряет отношение массы к заряду и позволяет сопоставить наблюдаемую массу с расчётной. Это сильная проверка массы, но одинаковая масса не всегда означает одинаковую структуру. Изомеры и некоторые модификации могут потребовать дополнительных методов идентификации.

Mass content не равен HPLC purity. Чистота по HPLC часто выражает относительную площадь пиков. Mass content показывает количественно определённую долю целевого вещества в материале. Вода, остаточные соли и другие нецелевые компоненты могут влиять на эту величину даже при высокой чистоте по HPLC.

Эндотоксин: отдельная строка COA

Эндотоксин стоит в COA отдельно от HPLC-чистоты и mass content, потому что отвечает на другой вопрос. Это липополисахарид из оболочки грамотрицательных бактерий, и хроматографическая чистота его не показывает. Образец может иметь высокий основной пик по HPLC и всё равно содержать эндотоксин, попавший на этапах синтеза или очистки [1].

Измеряют эндотоксин LAL-тестом (гель-тромб, хромогенный или турбидиметрический вариант, гармонизированный фармакопеями [3]). Результат записывают в единицах EU/mg или EU/mL. Пустое поле в этой строке не означает ноль, оно означает, что показатель не измеряли.

Почему нетто-содержание пептида бывает ниже навески

Масса порошка во флаконе не равна массе целевого пептида. Противоион из синтеза (например, трифторуксусная кислота или ацетат) и остаточная вода входят в общую массу материала, но пептидом не являются. Поэтому количественно определённое нетто-содержание пептида часто ниже полной массы материала [4].

Идентичность молекулы подтверждают отдельно, обычно методом LC-ESI-MS с профилированием примесей [2]. Эта проверка показывает, что это за вещество, а нетто-содержание показывает, сколько в материале целевого соединения.

Как сверить COA за минуту

  1. Сопоставьте номер партии на COA, этикетке и странице проверки. Если номер отсутствует или отличается, отчёт нельзя отнести к вашему образцу.
  2. Для HPLC смотрите числовой результат вместе с хроматограммой и условиями метода.
  3. Для MS сопоставьте ожидаемую и полученную массу. Полезно, когда отчёт объясняет зарядовое состояние или аддукт.
  4. Не превращайте одну цифру в три вывода. HPLC purity, MS identity и mass content остаются отдельными проверками.

Как выглядит понятный COA

Понятный отчёт привязан к лоту, называет методы и показывает первичные результаты. Если лаборатория даёт только строку с процентом, попросите хроматограмму, спектр массы и описание того, как определяли mass content.

Для партий Longeva номер лота можно сверить на странице проверки. COA подтверждает параметры именно протестированного образца. Он не заменяет описание метода, не объясняет границы анализа и не переносится автоматически на другую партию.

Общий контекст COA и статуса research-use описан отдельно: research-use пептиды и что подтверждает COA и почему происхождение и COA важнее цены. Эта страница намеренно ограничена несколькими ключевыми аналитическими показателями COA и не претендует на полный перечень всех методов.

Сертификаты анализа наших партий: архив COA.

Источники

  1. D'Hondt M, et al. Related impurities in peptide medicines. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2014. 10.1016/j.jpba.2014.06.012
  2. De Spiegeleer B, et al. Impurity profiling quality control testing of synthetic peptides using liquid chromatography-photodiode array-fluorescence and liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry: The obestatin case. Analytical Biochemistry, 2008. 10.1016/j.ab.2008.02.014
  3. Tamura H, et al. Outstanding Contributions of LAL Technology to Pharmaceutical and Medical Science: Review of Methods, Progress, Challenges, and Future Perspectives in Early Detection and Management of Bacterial Infections and Invasive Fungal Diseases. Biomedicines, 2021. 10.3390/biomedicines9050536
  4. Colalto C. Aspects of complexity in quality and safety assessment of peptide therapeutics and peptide-related impurities. A regulatory perspective. Regulatory Toxicology and Pharmacology, 2024. 10.1016/j.yrtph.2024.105699